TIL的临床应用与制备

TIL是肿瘤细胞免疫治疗中的重要组成部分。第一代的TIL，仅仅只有分离，扩增，回输3个阶段，无法从复杂的TIL细胞群中获得肿瘤特异性的T淋巴细胞。以SteveRosenberg教授为代表人物的第二代TIL，包括了分离，筛选，扩增，回输4个阶段，筛选出肿瘤特异性TIL再进行扩增，大大提高了TIL治疗肿瘤疾病的有效性。但是由于TIL制备技术复杂，国内目前医院提供的都还只是第一代的TIL。

TIL

TIL, 英文全称Tumor Infiltrating Lymphocyte，中文全称“肿瘤浸润淋巴细胞”。早在1988年，Steve Rosenberg教授就用肿瘤病人自身的TIL来治疗转移性黑素瘤。随着技术的革新与进步，2004年Steve Rosenberg教授在PNAS上发表文章指出：肿瘤特异性的TIL治疗转移性黑色素瘤的临床有效率大于50%，35个病人中18名病人有响应，其中4人完全响应（图1）。近年来，非常多的文献发表，指出病理切片中肿瘤组织周围TIL的存在和数目和病人的预后良好相关。有研究者建议把TIL作为T （Tumor, 原发肿瘤范围）N（Node, 淋巴结转移）M（Metastasis, 远端转移）之外，另外一个判断肿瘤分期和预后的重要标准。

图1，一名黑素瘤全身多发转移的病人（左）TIL治疗一个月后达到完全响应（右），摘自Rosenberg,S.A. （2004） PNAS 101, 14639-14645

那么肿瘤特异性的TIL到底是如何被用来治疗肿瘤的呢？

我们仍然借用SteveRosenberg教授2008年发表在Nature Reviews上的一张图来说明（图2）。第一步，我们得到病人的肿瘤组织块，其中混杂着体积较大的肿瘤细胞（浅蓝色）以及体积小而圆的T淋巴细胞（红色，绿色，深蓝色）；第二步，将不同种类的T淋巴细胞在细胞板上克隆化，并加入高浓度的IL-2来选择培养；第三步，在IL-2的刺激下不同种类的T淋巴细胞都得到了克隆扩增，形成了细胞群；第四步，用病人的肿瘤细胞和扩增后的T淋巴细胞反应，凡是能够发生杀瘤效应的T淋巴细胞群作为阳性TIL群留下（红色），其余的丢弃（绿色，深蓝色）；第五步，用负载了肿瘤特异性抗原的树突状细胞（DC）进一步扩增培养肿瘤特异性的TIL；最后，回输给预先做了清髓的肿瘤病人。

图2、肿瘤特异性TIL制备的全过程，摘自Rosenberg,S.A. （2008） Nature Review 8, 299-308

TIL治疗有哪些局限性呢？

正是由于TIL杀灭肿瘤的特异性和高效性，才在临床应用上获得了很好的客观有效率。那么，作为肿瘤细胞免疫疗法，TIL治疗有哪些局限行呢？第一，TIL制备技术复杂，通常需要筛选上百个甚至几百个T淋巴细胞克隆才能得到肿瘤特异性的TIL；第二，TIL在T淋巴细胞分类中属于效应T细胞（effector T cell）， 虽然杀瘤功能强大但是寿命短，不具备记忆能力（图3）。第三，局限于新鲜且无菌保存的肿瘤组织样本，对于那些无法提供此类样本的病人，无法提供TIL治疗；第四，部分肿瘤病人由于TIL数量过少或者没有，无法从肿瘤组织样本中分离得到TIL，而这类病人往往预后更差。

解决TIL治疗局限性的对策

为了解决第一个局限性，2014年Steve Rosenberg教授在JCI上发表文章，指出PD1阳性的CD8+TIL与PD1阴性的CD8+TIL相比，更容易分离得到肿瘤特异性的TIL。针对第二个局限性，Steve Rosenberg教授从TIL中得到的肿瘤特异性T淋巴细胞中进一步获得其T淋巴细胞受体（TCR）的遗传信息，通过基因修饰的手段转化病人的外周血中T淋巴细胞，再去治疗病人，从而也解决了第三和第四个局限性。

来源：源正细胞   作者：韩研妍