时隔3年后，韩春雨发布最新科研成果论文_医疗健康

2019

07/19

11:30

生物世界中国科学报医谷综合医疗健康

时隔3年，曾处于舆论旋涡的韩春雨公开了一项最新研究成果。

近日，韩春雨在预印本网站BioRxiv上发表了一篇关于基因编辑的新文章：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE。

文章共有5名作者，依次为Feng Gao, Yue Sun, Feng Jiang, Xiaoyue Bai, Chunyu Han，工作单位均为河北科技大学基因编辑研究中心。其中，韩春雨为通讯作者。

据了解，论文中提到的CasE是Ⅰ-E型 CRISPR复合物的核心成分，它通过结合特定的茎环区域单独处理pre-crRNA，称之为 CasE Binding S，简称为CBS。CasE保守His20参与催化活性，ΔHis26-TtCse3突变的CasE（dCasE）则失去了催化活性，但仍然与其靶标紧密结合。

在该研究中，通过将 split 荧光与dCasE的N端和C-末端（ΔHis20）融合，构建了活体RNA跟踪工具VN-dCasE-VC。该系统仅在存在靶RNA时才发出荧光，从而增强信噪比。

在活细胞中进行可视化的RNA追踪，不需要特定的亚细胞分布。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T细胞中的高水平表达和均匀分布表明CasE和dCasE适合于活细胞中的RNA操作。

为了测试CasE在哺乳动物细胞中表达时是否具有强活性，作者构建了“关闭”报告基因质粒CBS-GFP-N1。它由5′-UTR中的GFP mRNA和CasE结合位点（CBS）组成。当CasE被引入系统时，GFP表达水平急剧下降。

同时，为了进一步测试CasE活性，作者还构建了“开启”报告基因质粒RED-16×CBS-Lin28-C1，其中CBS插入RED单体基因的3′-UTR区和Lin28的上游。Lin28是RNA核保留信号，在其3′-UTR中具有lin28信号的RED单体mRNA几乎不能翻译成蛋白质。

CBS-CasE依赖限制性切断lin28信号并从核释放靶mRNA用于翻译（图1E和图1F）。这些表明CasE可以结合并切割哺乳动物细胞中的CBS。

另外，为了将dCasE-CBS相互作用设计到RNA追踪系统中，作者通过将split-FP5-7与dCasE蛋白结合。发现一个版本，即VN-dCasE-VC很难发出荧光，这可能是由于不正确的折叠或不稳定的状态，但是当与靶RNA（CBS）结合时，可以在荧光显微镜下清楚地捕获荧光信号，即使VN-dCasE-VC表达质粒的转染剂量非常低。

接下来，作者使用VN-dCasE-VC系统追踪哺乳动物细胞中过表达的β-肌动蛋白（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC系统在细胞质中显示出强荧光。此外还观察到，向靶mRNA添加更多CBS可改善信号，荧光追踪更清晰，因此，可以通过增加CBS的数量来检测低丰度的mRNA。

总的来说，韩春雨团队发明了一种新的RNA追踪工具，将其命名为VN-dCasE-VC，该系统能够追踪活细胞中没有背景的特定RNA，通过荧光将其可视化。

目前已有两种活细胞RNA追踪成像工具，一种是MS2，一种是Cas13a，韩春雨团队开发的dCasE系统，成像效果由于MS2，而且，dCasE蛋白的分子量为22kDa，远小于Cas13a的130kDa，dCasE的小分子量更容易递送至细胞内，因此更适合用于活细胞的RNA追踪。

一位接近韩春雨的人士透露：“这篇文章是此前韩春雨工作的延续，目的都是开发基因编辑工具。”

不过，值得注意的是，该研究目前发表于预印本网站，尚未经过同行评议，

对此，有科研人士指出，首发在未经同行评议的预印本上，是为了获得首发权。“韩春雨下一步还会投正式期刊的。”前述人士推测。

不知道此次新的研究成果是否会再次给韩春雨带来关注，2016年5月，《自然—生物技术》发表韩春雨团队新的基因编辑技术NgAgo，被媒体以“甘坐冷板凳、十年憋大招”的故事原型炒作而走红，此后半年，韩春雨个人及其所在大学陆续获得各类名誉和大量经费资助，但亦有国内多名基因编辑领域科学家实名发声称实验结果难以重复，怀疑实验结果的真实性。

2017年8月，《自然—生物技术》发表题为《是该数据说话的时候了》社论，宣布撤回韩春雨团队于2016年5月2日发表在该期刊的论文。

2018年9月，河北科技大学发布公告，韩春雨团队不存在主观造假。但依据有关规定，取消韩春雨所获得的荣誉称号，终止韩春雨团队承担的科研项目并收回科研经费。

韩春雨团队回应称，实验设计存在缺陷、研究过程存在着不严谨的问题。

有业界人士表示：“这波之后，NgAgo这个研究方向在中国做得很慢。韩春雨他们的工作开展起来也比较困难，连学生也没有新招。”

附韩春雨论文链接：

https://www.biorxiv.org/content/biorxiv/early/2019/05/13/635912.full.pdf

来源：生物世界中国科学报医谷综合

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